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CUT&Tag(CleavageUnderTargetsandTagmentation),即靶向剪切及转座酶技术,是⼀种利⽤酶锚定技术进⾏⾼效、⾼分辨率的DNA测序⽂库构建⽅法,也是替换传统的ChIP-Seq⽤以研究蛋⽩质-基因组互作关系研究的新⽅法,属于新⼀代超微量ChIPSeq技术。可⽤于检测组蛋⽩、RNApolymeraseII和转录因⼦等具有DNA结合功能的蛋⽩种类,对表观遗传学、肿瘤和⼲细胞等领域的研究具有重要意义。
CUT&Tag(Cleavage Under Target & Tagmentation)技术是一种研究蛋白质-DNA互作的新方法,它与ChIP-seq研究目的相同,在建库细胞量、信噪比、样本重复性等都有优势。
CUT&Tag 方法中用到了预装接头 DNA 并与蛋白 A/G 融合的超高活性 Tn5 转座酶。这种融合蛋白能与一抗结合,在抗体附近切割 DNA,并插入带有接头序列的短标签。回收标签化的 DNA 片段后,使用引物识别添加的标签中的序列进行 PCR 扩增,以生成测序文库。
原理简介:
在抗体引导下,ChiTag酶仅在⽬的组蛋⽩修饰标志、转录因⼦、染⾊质调控蛋⽩结合染⾊质的局部进⾏⽬的 DNA的⽚段化的同时添加测序接头,并释放到细胞外,⽽绝⼤部分⽆关的染⾊质还留在细胞核内,因⽽整个实验的信噪⽐⼤幅提⾼,同时简化了实验步骤。该⽅法可⼀管式⾼通量应⽤,并可与单细胞测序平台「⽆缝」结合。ChiTag酶在打断基因组的同时加上接头,不需要繁琐的补平加 A加接头,在⼀天内可以完成从细胞到测序⽂库制备全流程。
CUT&Tag
1、细胞渗透性处理
2、一抗进入细胞,与目的蛋白结合,二抗进入细胞,与一抗结合
4、加入Mg2+激活转座体,片段化目的蛋白局部DNA
5、提取DNA, PCR,文库构建完成
8、高通量测序
参数
甲醛交联
超声破碎
获取片段化DNA方法
细胞起始量
不需要
(T5可直接在DNA片段两喘加测序接头,一次PCR增即可)
完成时间
二抗
细胞核提取
低样本需求:细胞起始量较低(单细胞-5*105 ),从百万级降低到单细胞⽔平;
高重复性:CUT&Tag方法具有较高的重复性,可在相同样本中得到一致的结果;
高信噪比:相比传统的染色质免疫沉淀(ChIP)方法,CUT&Tag方法信噪比较高,减少非特异性结合和背景噪音;
流程简便:无需甲醛交联、细胞破碎和超声片段化DNA等步骤,简化实验操作流程;
简化的文库构建:通过添加“接头”到转座子上,只需进行简单的PCR扩增即可获得高质量的NGS文库;
较低的测序深度:相较于ChIP方法,CUT&Tag方法在保持高质量结果的同时,测序深度减少10倍左右,节省测序成本。
北京中科光析科学技术研究所承诺:我们将根据不同产品类型的特点,并结合不同行业和国家的法规标准,选择适当的检测项目和方法进行分析测试,或根据您的要求进行试验分析。为了不断改进我们的工作,我们致力于提高产品质控分析、使用性能检测能力,并持续加强我们团队的科研技术。同时,我们将积极跟进新的技术和标准,以最大程度地满足您的需求和市场要求。